被全世界骂了三年的韩春雨，默默发表了新论文，发明RNA...

被全世界骂了三年的韩春雨，默默发表了新论文，发明RNA成像系统  生物世界 2019-07-18 08:38:37

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近日，韩春雨在预印本网站BioRxiv发表了一篇关于基因编辑的新论文：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE.

该研究开发了一种新型的活细胞RNA追踪成像工具——VN-dCasE-VC，效果和可用性更强。

该论文署名单位为河北科技大学基因编辑研究中心，通讯作者为韩春雨，第一作者为高峰。

前情回顾

2016年5月2日，韩春雨（河北科技大学）作为通讯作者在国际顶级学术期刊 Nature Biotechnology 杂志发表了题为：DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute（使用NgAgo进行DNA引导的基因组编辑）的研究论文。

该研究称NgAgo对真核生物（包括人）具有基因编辑能力。该研究成功很快在世界范围内爆火，韩春雨老师此前籍籍无名，几乎一夜之间成为学术界网红，被赞誉为“在三流学校取得世界一流原创成果，打破国际基因编辑技术垄断”。

该论文通讯作者为韩春雨，第一作者为高峰，浙江大学教授沈啸为共同通讯作者，但在后续修改版本中，沈啸从作者名单中去除了。

2016年8月，河北科技大学成立基因编辑研究中心，计划投入资金逾2亿元。但NgAgo的研究成果引发广泛质疑，2017年8月3日，韩春雨撤回该论文。2018年8月31日，河北科技大学取消了韩春雨所获得的荣誉称号，终止了韩春雨团队承担的科研项目并收回了科研经费，收回了韩春雨团队所获校科研绩效奖励。

2019年4月4日，预印本网站BioRxiv刊登了一篇来自美国普渡大学研究人员的研究论文，表明NgAgo通过核酸内切酶活性介导增强大肠杆菌的同源重组。BioWorld第一时间解读并报道了该论文，该研究表明NgAgo可以编辑原核生物，但不能编辑真核生物基因组。

韩春雨最新论文的解读

CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核心成分，它通过结合特定的茎环区域单独处理pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE保守His20参与催化活性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则失去了催化活性，但仍然与其靶标紧密结合。

在该研究中，通过将 split 荧光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融合，构建了活体RNA跟踪工具VN-dCasE-VC。该系统仅在存在靶RNA时才发出荧光，从而增强信噪比。

在活细胞中进行可视化的RNA追踪，不需要特定的亚细胞分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞中的高水平表达和均匀分布表明CasE和dCasE适合于活细胞中的RNA操作。

为了测试CasE在哺乳动物细胞中表达时是否具有强活性，作者构建了“关闭”报告基因质粒CBS-GFP-N1。它由5'-UTR中的GFP mRNA和CasE结合位点（CBS）组成。当CasE被引入系统时，GFP表达水平急剧下降。

为了进一步测试CasE活性，作者还构建了“开启”报告基因质粒RED-16×CBS-Lin28-C1，其中CBS插入RED单体基因的3'-UTR区和Lin28的上游。Lin28是RNA核保留信号，在其3'-UTR中具有lin28信号的RED单体mRNA几乎不能翻译成蛋白质。

CBS-CasE依赖限制性切断lin28信号并从核释放靶mRNA用于翻译（图1E和图1F）。这些表明CasE可以结合并切割哺乳动物细胞中的CBS。

为了将dCasE-CBS相互作用设计到RNA追踪系统中，作者通过将split-FP5-7与dCasE蛋白结合。发现一个版本，即VN-dCasE-VC很难发出荧光，这可能是由于不正确的折叠或不稳定的状态，但是当与靶RNA（CBS）结合时，可以在荧光显微镜下清楚地捕获荧光信号，即使VN-dCasE-VC表达质粒的转染剂量非常低。

这个示意图画的，真是一言难尽...

接下来作者使用VN-dCasE-VC系统追踪哺乳动物细胞中过表达的β-肌动蛋白（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统在细胞质中显示出强荧光。此外还观察到，向靶mRNA添加更多CBS可改善信号，荧光追踪更清晰，因此，可以通过增加CBS的数量来检测低丰度的mRNA。

总的来说，韩春雨团队发明了一种新的RNA追踪工具，将其命名为VN-dCasE-VC。该系统能够追踪活细胞中没有背景的特定RNA，通过荧光将其可视化。

目前已有两种活细胞RNA追踪成像工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩春雨团队开发的dCasE系统，成像效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的分子量为22kDa，远小于Cas13a的130kDa，dCasE的小分子量更容易递送至细胞内，因此更适合用于活细胞的RNA追踪。

需要特别说明的是，该研究目前发表于预印本网站，尚未经过同行评议，BioWorld如实解读该文章，更多信息可点击左下方阅读原文，获取该论文。

通讯作者：韩春雨

第一作者：高峰

论文链接：
https://www.biorxiv.org/content/ ... /13/635912.full.pdf
本文由生物世界原创发布

   

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• LBH26 4天前
  韩春雨前面的论文，很可能是实验过程某环节被污染了，这也是个了不起的结果。就象加点卤水成了豆腐；本为炼丹沾了点硫磺却成了火药；本想治疗心脏病却把药做成了伟哥
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• 111 4天前
  笑死我了 那个说论文主要看第一作者的 你是没出过国吧 想出去外国名校 通讯作者比第一作者管用的多
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• 牧水1 4天前
  不知为什么，一直希望韩春雨之前的成果是成功的。
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• YOOOYOOO 4天前
  看过采访韩的实验室，非常简陋粗糙。我看有人举例子说居里夫人实验室也很简陋，拜托这是21世纪的前沿生物技术科学！生物技术实验对洁净度和环境的要求非常高！老实讲，我对韩春雨实验室里出来的研究结果表示相当的怀疑。
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• 用户9696944156506 4天前
  科学的道路崎岖又漫长，支持韩春雨教授继续攀登。不是每个攀登者都能到达顶峰，但我们依然要为他们鼓掌
  
  
  

我知道答案 本帖寻求最佳答案回答被采纳后将获得系统奖励10 天空金币 , 目前已有1人回答

在这个版块混了这么久了，第一次看见这么给你的帖子！